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    2014特码93期:糖基化太复杂?赛默飞离子色谱让你迎糖而上!

    发布:赛默飞世尔科技(中国)有限公司
    浏览次数:364

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    糖基化分析的重要性

    单抗药物是近年来发展最快的药物品种,在整个药物市场产值中已经占有超过12%的份额,超过1200亿美元。目前,全球已经批准的单克隆抗体药物超过了80个,年销售额增长率超过30%,主要应用于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、炎症性疾病等治疗领域。国内各大医药企业也聚焦于单抗药物的研发。

    单克隆抗体结构主要由Fab和Fc两大功能区组成,在Fab段和Fc段特定的位点存在糖基化修饰。这些糖基化修饰发挥着极其重要的作用:能够维持抗体的空间构象、稳定抗体的结构,提高药物的热稳定性;糖链结构还能?;た固宀皇苣承┑鞍酌杆?,延长半衰期,提高药效;Fc段的糖基化修饰还会对抗体的安全性造成影响。因此抗体的糖型检测在产品质量控制中就非常重要。

    目前的分析方法

    糖链常用的分析方法有:液相色谱法、毛细管电泳法和高效阴离子交换色谱法。但无论是液相色谱法还是毛细管电泳法,都必须使用专用试剂进行荧光衍生。此衍生耗时长(4小时)且会导致唾液酸丢失,不能准确分析含唾液酸样品。且也无法分析磷酸化糖及硫酸化糖。而离子色谱无需衍生,定量准确,可以覆盖分析所有糖类型。

    离子色谱-糖分析方法

    高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法,是目前领先的糖分析方法,具有无需衍生、分离度好、灵敏度高、同时适用所有糖修饰形态等诸多优势。

    对于单抗药物的复杂糖基化,离子色谱可以从三个方面给予解析:

    1.糖链水平的分析——N糖图谱测定

    N—糖基化修饰的糖链可以通过肽糖苷酶F或肽糖苷酶A酶切作用,或者肼解作用从糖蛋白上释放出来。糖链经净化后可直接进样,无需衍生,避免了衍生化过程中唾液酸化聚糖的结构改变。

    Ofatumamab的N糖图谱

    离子色谱还可以和高分辨质谱联用,实现对色谱峰的鉴别。以Q Exactive为代表的Orbitrap超高分辨率质谱对未标记的糖具有高灵敏度,可解析糖链结构。安培检测器、高分辨质谱和离子色谱联用,可同时解决糖链的定性和定量分析。

    2.单糖组成测定

    单抗糖链主要由葡萄糖胺、半乳糖胺、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、唾液酸等单糖组成。单糖组成测定可以从基础水平上对单抗的糖组成差异给出解析。

    对于中性糖和氨基糖的分析,通常使用酸水解的方式,使蛋白中的单糖释放。样品水解后,直接进样,无需衍生。

    3.唾液酸的测定

    唾液酸存在于单抗的糖链末端,对于单抗在生物体内功能的发挥起着相当重要的作用,影响药物的有效性。唾液酸的差异,是人源抗体和其他生物抗体差异的一个指标。唾液酸的释放,可使用温和酸水解或酶解。使用离子色谱分析游离的唾液酸样品,可直接进样,无需衍生。不同结构的唾液酸在CarboPac PA10色谱柱上可以得到快速高效的分离。

    综上所述,离子色谱(IC)可用于单抗药物的聚糖图谱分析、单糖组成分析、唾液酸测定等方面。糖型检出覆盖率更高,适用于复杂唾液酸修饰糖型,极大的完善和推动了糖蛋白类药物N-糖链的质控分析。

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    2019-08-28 14:13:48
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