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    曾道人特码玄机图分析:紫外分析仪RAPD操作规程

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    香港惠泽特码内部资料 www.temid.tw 紫外分析仪分为很多系列,有三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、可照相紫外分析仪等系列,不同的紫外分析仪有不同的用途。紫外分析仪采用不同波长引进电泳分析、检测,PCR产物检测,DNA指纹图谱分析,纸层分析或薄层分析等。


    操作规程

    1.制备DNA

    对萨姆布鲁克等(1996) 的方法加以参照并且稍稍改进。

    (1)在裂解液中溶入切碎的100 mg左右的足肌。


    (2)将蛋白酶K加入使终浓度为100μg/ ml,充分混合均匀之后在37摄氏度下消化4~5小时。


    9.jpg


    (3)依次将体积的饱和酚、酚/ 氯仿/ 异戊醇(25 :24 :1) 和氯仿/ 异戊醇(24 :1) 抽提蛋白加入到样品中,之后使用双倍体积的无水乙醇沉淀,干燥DNA以后再将适量TE加入溶解,保存在4摄氏度下。


    (4)使用紫外分光光度计对DNA 纯度进行测定和对模板浓度进行估算,并且采用琼脂糖凝胶电泳对DNA分子量进行检测。


    2、扩增

    试剂:

    20 ng 模板DNA

    2U Taq 酶

    0.12 mmol/ L dNTPs

    0.12 mmol/ L 引物

    2 mmol/ L Mg2+

    10 ×Buffer

    反应总体积为25μl。


    仪器:

    PCR 扩增仪


    PCR反应程序:

    (1)95摄氏度下预变性5分钟,94摄氏度下变性45秒,36摄氏度下复性45秒,72摄氏度下延伸90秒,经过30个循环,72摄氏度延伸10分钟,保存于4摄氏度。


    (2)每次不含模板DNA 的空白对照都设于PCR 反应中。


    (3)通过1.2 %琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行分离,溴化乙锭染色,在凝胶成像系统下观察并拍照记录。


    3、处理数据

    记RAPD 电泳谱带位点上无扩增位点为0,有扩增位点的为1,将原始数据矩阵建立,统计数据利用Pop Gene(Ver1132) 软件。




    2019-09-24 17:33:53 浏览次数:57次
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