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    特码平码五不中:紫外分析仪RFLP研究

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    香港惠泽特码内部资料 www.temid.tw 紫外分析仪分为很多系列,有三用紫外分析仪、暗箱式紫外分析仪、可照相紫外分析仪等系列,不同的紫外分析仪有不同的用途。紫外分析仪采用不同波长引进电泳分析、检测,PCR产物检测,DNA指纹图谱分析,纸层分析或薄层分析等。


    介绍

    在DNA标记技术中,发展的zui早的即是RFLP标记。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的不同,限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变导致了这种差异。

    自问世以来,RFLP(限制性内切酶片段长度多态性)作为di一代分子生物学标记在多门生物学科研究中得到了非常广泛的应用,然而,其仅在近几年才开始在植物抗性研究方面应用。

    RFLP可以定位和分离植物的抗性基因。利用RFLP技术,对于核基因组或叶绿体基因组,特别是后者,如果可以对纯净DNA进行提取,那么其多态性就能够从酶切后的电泳图谱直接地看出。在污染环境下种群内、种群间不同水平的物种抗性分化进化水平上的差异能够通过这一方法测定出来。RFLP技术不但能够在基因型分型研究中使用,而且同样能够在不同环境中微生物多样性的研究中使用。


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    基本类型

    1、序列多态性

    由于有较大部分的缺失、重复、插入等变异在DNA链内发生,尽管没有改变其内切酶位点碱基序列,然而却改变了原有的内切酶位点相对位置,从而引发了RFLP的出现。


    2、点的多态性

    DNA链中发生单个碱基的突变是其表现,并且一个新的酶切位点的形成或者一个原有酶切位点的丢失因为突变而造成。Southern杂交就能够诊断。


    特点

    相比于核酸序列分析,RFLP能够将序列分析中许多非常繁琐工序省去,然而和RAPD比较来说,RFLP更加的耗费时间和精力,需要预先对DNA多种酶切、转膜以及探针的制备等多个步骤进行操作,只鉴定基因组单拷贝序列。然而其能够对多态性产生的突变类型是由碱基突变或倒位、 还是由缺失、插入造成的进行测定,也能够被用于多态性是由父本还是母本产生的测定。

    低拷贝编码序列遍布于RFLP,并且稳定性非常高,然而RFLP实验操作复杂,有着较为高昂的费用,以及比较长的检测周期,对于大规模的分子育种不适用。在植物分子标记辅助育种中需要用PCR为基础的标记替代RFLP。


    主要步骤

    1、提取DNA


    2、DNA用限制性内切酶酶切


    3、用凝胶电泳分开DNA片段


    4、在滤膜上移入DNA片段


    5、特定的DNA片段(Southern杂交)利用放射性标记的探针杂交来显示和对结果进行分析。


    2019-09-23 17:33:05 浏览次数:72次
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